Geenisiirtotekniikasta yksisirkkaiseen kasviin

Seuraa 
Viestejä45973
Liittynyt3.9.2015

Hei!

Nyt tarvisin apua.

Kun siirretään geeniä plasmidin avulla yksisirkkaiseen kasviin, (jolloin ei siis voi käyttää agrobakteeria), ammutaanko kasvisolukkoon koko bakteeri vai vain plasmidi?

Mikäli vain plasmisi, niin miten plasmidit saadaan eristettyä niistä kaikista tuhansista bakteereista? Jos taas ammutaan koko bakteeri, miten haluttu geeni liittyy kasvin omaan DNA:n?

Pyry

Kommentit (1)

Vierailija

En ole kuullutkaan että kokonaisia bakteerisoluja voisi käyttää vektoreina. Jos siis on maljalla bakteereita, joissa on palsmidi, johon on jo valmiiksi laitettu joku mielenkiintoinen sekvenssi, niin plasmidi on ensiksi saatava sieltä ulos. Homma voisi mennä vähän samaan tapaan kuin DAN:n puhdistaminen. Lyysataan solut, poistetaan proteiinit, lipidit sun muut roskat. Jäljelle jää toivonmukaan vain plasmidit.

Tähän on muuten olemassa kaupallisia tuotteita. google: plasmid purification kit. Moisen operaation suorittaminen tosin ei taida kotioloissa onnisuta, ellei sinulla satu olemaan sentrifuugia, pipettejä, autoklaavia sun muuta peruskamaa kotona nurkissa pyörimässä.

Noh. Sitten kun sitä puhdistettua plasmidia vihdoin on epparisa jokunen mikrolitra, niin voidaan alkaa miettimään sen siirtoa kohdeorganismiin. Yksi uusi ja hieno menetelmähän on kiinnitää palsmidit pieniin kultahippusiin ja ampua ne soluseinän läpi. En tiedä tehdäänkö näin kasvien kohdalla, mutta en nyt yhtäkkiä keksi estettäkään sille.

Geenin siirrossa saantoprosentit ovat erittäin surkeita joka välissä. Jos vaikka lähdetään miljoonasta bakteerisolusta, ehkä vain tuhannesta saadaan plasmidit talteen. Kun taas tuhannet plasmidit tyrkätään kohdeorganismiin, vain olematon murto-osa niistä itseasiassa liittyy osaksi isäntänsä genomia. Tässä hommassa määrä korvaa laadun.

Uusimmat

Suosituimmat